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ISSN : 1229-3571(Print)
ISSN : 2287-819X(Online)
Korean Journal of Organic Agricultue Vol.25 No.4 pp.901-916
DOI : https://doi.org/10.11625/KJOA.2017.25.4.901

Studies on Natural Plant Extracts for Methane Reduction in Ruminants

Shin-Ja Lee**, Jun-Sik Eom***, Su-Kyoung Lee****, Il-Dong Lee***, Hyun-Sang Kim***, Han-Beyol Kang***, Sung-Sill Lee*****

† These authors made an equal contribution to this paper.

Corresponding author, 경상대학교 응용생명과학부(BK21)&농업생명과학연구원, +82-55-772-1883)
20170929 20171020 20171024

Abstract

This study was conducted to evaluate natural plant extracts for methane gas reduction in ruminants. Rumen fluid was collected from cannulated Hanwoo cow (450±30 kg) consuming 400 g/kg concentrate and 600 g/kg timothy. The 15 ml of mixture comparing McDougall’s buffer and rumen fluid in the ratio 2 to 1, was dispensed anaerobically into 50 ml serum bottles. Rumen fluid contents were collected and in vitro fermentation prepared control (timothy, 300 mg), ginseng, balloon flower, yucca plant, camellia, tea plant and ogapi extracts were added at the level of 5% against 300 mg of timothy as a substrate (v/w) and incubated for 3, 6, 9, 12, 24, 48, and 72 h. In vitro pH values range 6.55~7.41, this range include rumen titration. The dry matter digestibility was not differ between all treatments and control. Total gas emission was significantly higher (p<0.05) in ginseng and balloon flower treatments on 24 h than in control. Carbon dioxide emission was not differ all treatments on 9 h than in control and significantly higher (p<0.05) yucca plant, camellia and tea plant treatments on 12 h than control. Methane emission was not differ all treatments on 6 h than in control. The rumen microbial growth rate was significantly higher (p<0.05) in ginseng, balloon flower on 12 h and significantly higher (p<0.05) in ginseng, yucca plant, tea plant and ogapi treatments on 24 h than in control. Total VFA was significantly higher (p<0.05) in tea plant and ogapi treatments on 12 h than in control and significantly higher (p<0.05) in ginseng, balloon flower treatments on 48 h than in control. Acetic acid was significantly lower (p<0.05) in ginseng and balloon flower treatments on 24 h than in control. Propionic acid was significantly higher (p<0.05) in ginseng and balloon flower treatments on 48 h than in control. As a results, sixth natural plant extracts had no significant effect dry matter digestibility and negative on rumen fermentation, but not effect methane reduction.


반추동물의 메탄감소를 위한 천연식물 추출물에 관한 연구

이 신자**, 엄 준식***, 이 수경****, 이 일동***, 김 현상***, 강 한별***, 이 성실*****
**경상대학교 농업생명과학연구원&중점연구소
***경상대학교 응용생명과학부(BK21)
****경상대학교 농업생명과학연구원

초록


    Ⅰ.서 론

    20세기 이후 지구온난화의 가속화가 진행되면서 이상기후로 인한 자연재해가 발생되어 인류의 삶에 악영향을 미치고 있다. IPCC에서 선정한 온실가스 종류는 이산화탄소, 메탄, 아산화질소, 프레온, 오존 등이 있다. 이산화탄소는 온실가스의 약 72%이며, 메탄은 약 18%로 차지하는 비율은 적다. 그러나 메탄 1개 분자와 이산화탄소의 21개 분자가 지구온난 화에 미치는 영향이 같은 만큼(IPCC, 2001) 메탄발생량이 증가하게 되면 지구온난화가 더 욱 가속화된다.

    전체 메탄발생량 중 반추동물에 의해 발생하는 메탄은 약 15%를 차지하고, 그 중 장내발 효에서 발생되는 메탄의 비중이 약 75%를 차지한다(Crutzen, 1995). 반추동물의 메탄은 반 추위 내 methanogen이 protozoa에 공생하여 발생하게 되는데(Newbold et al., 1997), 반추동물 의 메탄 발생량을 감소시킨다면 반추위 내 서식하고 있는 미생물의 발효과정 중 생성되는 propionate 생성량의 증가(Grobner et al., 1982)로 인해 에너지 효율뿐만 아니라 반추가축의 성장률 및 유생산 증대의 효과(Makkar et al., 1993)가 있다고 알려져 있다. 즉 반추동물의 메탄발생량을 감소시킨다면 지구온난화를 늦추는 환경적 측면과 사료에너지의 사료 효율을 높이는 영양학적 측면을 향상 시킬 수 있는 일석이조의 효과가 나타난다(Lee and Ha, 2009).

    현재까지 반추동물의 메탄 발생을 줄이는 연구로는 사료 조절 급여(Kim et al., 2011), hal ogenated analogues (Hwang et al., 2012), ionophore계통의 monensin (Odongo et al., 2007), long -chain fatty acid (Lee et al., 2015), acetogen competes (Lopez et al., 1999) 등을 이용한 연구사 례가 있다. 그러나 halogenated analogues나 ionophore 계통의 항생제를 사용하면 2차 생산 물질에 잔류되거나 내성 문제가 발생되어 한국에서는 사용이 전면 금지되어 있고, methano gen의 항생제 적응으로 인해 메탄 감소 효과가 없어진다는(Johnson and Johnson, 1995) 단점 이 있다. 위와 같은 단점을 보완하기 위한 첨가물 중 천연 식물을 이용하여 반추동물의 메 탄가스 감소를 위한 연구가 증가하고 있는 추세이다.

    천연 식물 중 인삼은 여러 효소의 활성을 증가시키는 장점이 있고(Lee and Chung, 1977), 도라지 내 여러 성분 중 platycodin D는 항암활성 효과(Choi et al., 2001), 항염증 효과(Ahn et al., 2005), 항비만 효과(Lee et al., 2010), 그리고 콜레스테롤 저하 효과(Zhao et al., 2006) 가 있다. 유카식물은 항균활성 물질로 작물보호 및 자연생태계 유지에 많이 쓰이고 있으며 (Kim, 2004), 동백나무의 잎과 꽃 추출물은 항미생물 활성 및 항산화 효과(Lee et al., 2005), 항균 효과(Hahn, 2005), 혈전용해 효소 활성(Lim et al., 2006) 및 혈액 암세포성장 억제 효과 (Kim et al., 2003)가 있다. 차나무는 항진균, 항염증 및 항산화 효과(Sur et al., 1998)가 있고, 오갈피는 자양, 강장제(Choi et al., 2001)로 사용한다는 보고가 있다.

    따라서 위와 같은 효과를 가진 천연 식물 인삼(Ginseng), 도라지(Balloon flower), 유카식 물(Yucca plant), 동백나무(Camellia), 차나무(Tea plant) 및 오갈피(Ogapi) 추출물의 첨가가 in vitro 메탄 발생 및 반추위 발효 성상에 미치는 영향에 대해 구명 하고자 연구를 실시하게 되었다.

    Ⅱ.재료 및 방법

    1.공시동물 및 시험설계

    경상남도 진주시 경상대학교 야생동물보호센터에서 반추위에 cannula가 장착된 한우 암 소 1두(체중 450±30 kg)로부터 in vitro 반추위 발효 시험을 위한 시험용 위액을 채취하였고, 사료는 timothy와 농후사료 비율을 6:4로 하여 체중의 2%를 1일 2회(09:00 및 17:00) 분할 급여하였고, 물과 미네랄 블록은 자유섭취토록 하였다. AOAC (2012)법으로 분석한 timothy 화학적 조성 및 농후사료의 성분함량은 Table 1-1, 1-2와 같다.

    2.공시재료 및 시험방법

    공시재료는 65℃ dry oven에서 24시간 건조시킨 timothy를 2 mm screen이 장착된 wiley mill로 분쇄하여 기질로 이용하였다. 기질은 3 cm × 3.5 cm로 제작한 nylon bag에 0.3 g 투여 후 sealing하였고, 혐기상태의 McDougall’s buffer (1948)와 반추위액을 2:1 비율로 섞은 배양 액 15 ml를 50 ml serum bottle에 넣은 후 aluminum seal과 butyl rubber를 이용하여 밀봉하였 다. 6가지 천연 식물 추출물 인삼(Ginseng), 도라지(Balloon flower), 유카식물(Yucca plant), 동백나무(Camellia), 차나무(Tea plant) 및 오갈피(Ogapi)는 한국식물추출물은행에서 분양받 았으며(Table 2), dimethyl sulfoxide (Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, Mo, USA) 1 ml에 희석한 후 15 μl 분주 후 39℃ shaking incubator (Jeio Tech, SI-900R; 120 rpm)에서 발효시간 별(3, 6, 9, 12, 24, 48 및 72시간)로 식물 추출물을 분주하지 않은 timothy를 포함한 7처리 3반복 147개의 serum bottle로 in vitro 시험을 수행하였다.

    3.조사항목

    1)pH

    pH는 가스 발생량 측정 후 serum bottle의 aluminum cap 및 butyl rubber를 weaton decapper (Weaton co., USA)를 이용하여 제거하여 건물소화율 실험을 위한 nylon bag을 수거 후 각 발효시간대별(3, 6, 9, 12, 24, 48 및 72시간) serum bottle 내 배양액을 pH meter (Mettler Toledo, MP230)를 이용하여 측정하였다.

    2)건물소화율

    배양액 채취 후 nylon bag을 수거하여 물을 채운 수조에 넣고 heidolphs rotamax 120 (Heidolph Instrument, Germany)를 이용하여 100 rpm 으로 20분씩 3회 씻은 후 65℃의 dry oven (Jeio tech, Korea)에서 약 24시간 건조시켜 건물 잔량을 측정하였다. 건물 소화율 공식 은 아래와 같다.

    건물소화율(%) =  발효 전 건물 무게 - ( 여과 후 남은 무게 - blank ) 발효 전 건물 무게  × 100

    3)총 가스, 이산화탄소 및 메탄 발생량

    Serum bottle을 shaking incubator에서 꺼낸 후, Theodorou 등(1994)의 방법으로 serum bottle 의 head space에 있는 가스 발생량을 detachable pressure transducer 및 digital read-out voltmeter (Laurel Electronics, Inc, CA, USA)를 사용하여 측정하였고, 10 ml profi syringe 주 사기를 이용하여 가스 포집 후 9 ml 진공시험관(vacutainer)에 옮겨 담았다. 총 가스, 이산화 탄소 및 메탄 발생량은 1 ml profi syringe 주사기로 이용하여 포집 후 GC (HP5890 Gas Chromatography, USA)를 사용하여 분석하였다.

    4)미생물 성장량

    배양액을 1.5 ml eppendorf tube에 1 ml 채취하여 사료입자를 제거하기 위해 3,000 rpm에 서 3분간 원심분리하여 새로운 eppendorf tube에 상등액을 채취 후, 14,000 rpm에서 3분간 원심 분리하여 미생물 pellet을 침전시켜 상등액을 제거하고 pellet에 sodium phosphate buffer (pH 6.5)를 1 ml 첨가하는 세척 과정을 3회 반복 후 spectrophotometer (BIO-RAD, Model 680)를 이용하여 550 nm에서 O.D. (optical density) 값을 구하여 미생물 성장량을 측정하였 다.

    5)VFA(Volatile Fatty Acid)

    배양액을 1.5 ml eppendorf tube에 1 ml 채취하여 12,000 rpm에서 3분간 원심 분리하여 사 료 입자를 제거하고, 상등액을 0.20 μm syringe filter를 이용하여 2 ml serum bottle에 여과 후 -80℃ deep freezer에 보관하였고, 분석은 HPLC (High performance liquid chromatography, Agilent-1200, Germany)를 이용하였다. 시료의 주입량은 20 μl였고, 이동상 용액은 0.0085N H2SO4을 사용하였으며, 유속은 0.6 ml/min이었다. Column은 300 mm × 7.8 mm I.d MetaCarb 87H (Varian, USA)를 사용하였으며, 온도는 35℃에서 사용하였다.

    4.통계처리

    본 시험에서 얻은 결과들은 SAS package program (1996)의 general linear model (GLM) procedure를 이용하여 분산분석을 하였고, Duncan’s multiple range test (Duncan, 1995)의 다 중검정방법으로 평균 간의 유의성을 검정하였다.

    Ⅲ.결과 및 고찰

    1.pH

    6가지 천연 식물 추출물이 in vitro 반추위 발효성상에 따른 pH의 변화에 대한 결과는 Table 3과 같다. 발효시간이 지날수록 pH는 낮아지는 경향을 보였으며, 발효 3, 6, 9시간대 pH는 7.12~7.41로 높게 측정되었는데 McDougall Buffer의 pH 값이 7.5 범위이므로(Hwang et al., 2013), 본 실험의 결과에 영향을 주었을 것으로 사료된다. 발효 6, 9, 12시간대 차나무 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았고, 발효 72시간대 유카식물, 차나무, 오 갈피 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았으며, 이를 제외한 발효시간대에 는 대조구와 첨가구에 유의적(P<0.05) 차이가 없었다. 반추위 내 섬유질 함량이 높은 사료 의 소화에 적절한 pH의 범위는 6.0~6.8 (McCullough et al., 1968)로 발효 24시간대 이후 모 든 첨가구의 pH 범위는 6.55~6.75로 대부분 반추위 내 적정 pH 범위에 속하는 결과가 나타 났다.

    2.건물 소화율

    6가지 천연 식물 추출물이 in vitro 반추위 발효 성상에 따른 건물 소화율 결과는 Table 4 와 같다. 건물 소화율은 전 발효시간대에 첨가구와 대조구간 유의적(P<0.05)인 차이가 없었 으며, 특히 발효 3, 6, 9시간 건물소화율의 변화가 이루어지지 않은 것은 3, 6, 9시간대 미생 물 성장량이 대조구와 유의적(P<0.05)인 차이가 나타나지 않는 것과 같은 현상이라 생각한 다. Hristov (1999)에 따르면 알팔파를 섭취하는 어린 암소에게 유카식물 파우더를 첨가하였 을 때 역시 소화율에는 유의적인 차이가 나타나지 않았다는 결과가 나타났다. 또한, Ok (2010)in vitro 실험에서 유카식물 첨가구간 건물 소화율이 증가하지 않는 결과와 일치하 였다. 발효 12시간대 이후 건물 소화율은 전 첨가구간 대조구와 유의적(P<0.05)인 차이가 나타나지 않았다.

    3.총 가스, 이산화탄소 및 메탄 발생량

    6가지 천연 식물 추출물이 in vitro 반추위 발효 성상에 따른 총 가스, 이산화탄소 및 메 탄 발생량 결과는 Table 5와 같다. 총 가스 발생량은 발효 24시간대 인삼, 도라지 첨가구에 서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았고, 발효 72시간대 동백나무 첨가구를 제외한 나 머지 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았다. 총 가스 발생량이 줄어들지 않 는 것으로 보아 6가지 천연 식물 추출물은 반추위 내 미생물뿐만 아니라 발효성상에 영향 을 미치지 않는 것을 알 수 있다. 이산화탄소 발생량은 발효 6시간대 유카식물 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 낮았고, 발효 12시간대 유카식물, 동백나무, 차나무 첨가 구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았다. 발효 24, 48시간대 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)인 차이가 나타나지 않았으며, 발효 72시간대 동백나무 첨가구에서 대 조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았다. 식물추출물을 첨가한 메탄발생량 저감 선행연구 는 pen 등(2006)과 Gel 등(2012)이 있으며, Kim 등(2015)의 실험에서 9시간대 동백나무 추출 물에서도 감소하는 효과를 보였다. 그러나 본 실험에서 이용된 유카식물, 동백나무 추출물 의 첨가는 메탄 감소에 효과가 없었으며, 뿐만 아니라 나머지 식물 추출물에서도 감소 효 과는 나타나지 않았다. Ok 등(2011)in vitro 실험 오갈피 첨가구에서도 메탄 발생량 감소 에 영향을 미치지 않는 결과와 일치 하였다. 메탄 발생량의 비율은 24시간대 이후 급격히 증가하였는데 이와 같은 결과는 식물 추출물의 첨가는 발효 초기에는 일시적인 효과가 있 지만, 발효 시간이 지날수록 지속성이 떨어지기 때문에 위와 같은 결과가 나타났다고 사료 되며 위 실험에 사용된 식물 추출물 외 Lee 등(2016)과 Manlin 등(2012)의 결과에서도 발효 시간이 지날수록 메탄 발생량의 비율이 점점 증가하는 것을 볼 수 있었다.

    4.미생물 성장량

    6가지 천연 식물 추출물이 in vitro 반추위 발효 시간에 따른 미생물 성장량 결과는 Table 6과 같다. Pen 등(2006)의 유카식물 추출물 실험결과 in vitro 발효 6시간까지 미생물 성장량 이 높게 측정되었다는 연구 결과가 있었지만, 본 실험에서는 발효 3, 6, 9시간대 유카식물 첨가구를 포함한 천연 식물 추출물 모든 첨가구에서 대조구와 차이를 보이지 않았다. 발효 12시간대 총 가스 발생량이 가장 높았던 인삼, 도라지 첨가구에서 대조구에 비해 유의적 (P<0.05)으로 높았으며, 발효 24시간대 인삼, 유카식물, 차나무, 오갈피 첨가구에서 대조구 에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았다. 발효 48시간대 동백나무 첨가구에서 대조구에 비해 유 의적(P<0.05)으로 낮았고, 오갈피 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았으며, 발효 72시간대 인삼 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았다. 특히 발효 24시 간대 인삼, 유카식물, 차나무, 오갈피, 발효 48시간대 오갈피, 발효 72시간대 인삼 첨가구는 대조구에 비해 총 가스 발생량 및 메탄 발생량의 감소가 일어나지 않는 것을 보아 protozoa 의 감소는 일어나지 않았으나, bacteria의 수가 증가 하여 미생물 성장량이 높게 측정된 것 으로 사료되며, sliwinski 등(2010) 유카식물 추출물 첨가 실험에서의 protozoa 감소가 일어 나지 않은 선행 연구 결과와 일치하였다. 추후 Real-Time PCR을 통해 미생물의 군집 변화에 대한 추가적인 연구가 필요하다고 생각된다.

    5.VFA(Volatile Fatty Acid)

    6가지 천연 식물 추출물이 in vitro 반추위 발효 시간에 따른 VFA 결과는 Table 7과 같다. Total VFA 농도는 발효 3, 6, 9시간대 모든 첨가구에서 대조구와 차이를 나타나지 않았는 데, 유카식물 첨가구에서 total VFA 농도에 영향이 없었다는 Pen 등(2006)의 연구결과와 일 치하였다. 발효 12시간대 차나무, 오갈피 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높 았는데 acetate 농도, propionate 농도가 증가하여 total VFA 농도가 높아 위와 같은 결과가 나타났다고 사료된다. 발효 24시간대 인삼, 차나무 첨가구를 제외한 나머지 첨가구에서 대 조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 낮았다. 발효 48시간대에 인삼, 도라지 첨가구에서 대조구 에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았으며, 발효 72시간대 인삼, 도라지, 유카식물 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았다. Acetate 농도는 발효 3시간대 유카식물 첨가구에 서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 낮았고, 발효 24시간대 인삼, 도라지, 오갈피 첨가구 에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 낮았으며, 발효 48, 72시간대 모든 첨가구에서 대 조구와 차이를 보이지 않았다. Propionate 농도는 발효 3시간대 유카식물 첨가구에서 대조 구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았고, 발효 12시간대 차나무, 오갈피 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았으며, 발효 48시간대 인삼, 도라지 첨가구, 발효 72시간대 인 삼 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았다. 특히 발효 3시간대의 유카식물 첨가구의 acetate 농도는 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 낮았고, propionate 농도는 대조 구에 비해 유의적(P<0.05)으로 높았다. 이는 propionate 농도가 높으면 acetate 농도가 감소한 다는 Wina 등(2005)의 결과와 일치 하였다. 반추위 발효 과정 중 생성되는 propionate 농도 가 증가하면 메탄 발생량을 감소시킨다(Grobner et al., 1982)는 결과가 있지만 본 연구에서 는 propionate 농도가 높은 첨가구에서 메탄 발생 감소의 결과는 나타나지 않았다.

    Ⅳ.요 약

    6가지 천연 식물 추출물의 첨가가 반추동물의 메탄 감소에 대한 연구를 수행하였다. 반 추위액은 cannula가 장착된 한우에서 채취하였으며, 공시축의 사양관리는 timothy와 농후사 료 6:4 비율로 급여하였다. 50 ml serum bottle에 timothy 0.3 g, 반추위액 5 ml, McDougall’s buffer 10 ml를 각각 넣고 인삼, 도라지, 유카식물, 동백나무, 차나무, 오갈피 추출물을 기질 의 5%를 첨가한 뒤 발효시간대별(3, 6, 9, 12, 24, 48, 및 72시간) 7처리 3반복 수행하였다. pH는 6.55~7.41로 반추위 적정 pH 범위에 속하였다. 건물소화율은 첨가구에서 대조구에 비 해 유의적(P<0.05)인 차이가 없었다. 총 가스 발생량은 발효 24시간대 인삼, 도라지 첨가구 에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 증가하였다. 이산화탄소 발생량은 발효 9시간대, 메탄 발생량은 6시간대에서 첨가구와 대조구간 유의적(P<0.05)인 차이가 나타나지 않았다. 미생물성장량은 발효 12시간대 인삼, 도라지 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으 로 증가하였고, 발효 24시간대 인삼, 유카식물, 차나무, 오갈피 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 증가하였다. Total VFA 농도는 발효 12시간 차나무, 오갈피 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 증가하였고, 발효 48시간 인삼, 도라지 첨가구에서 대조 구에 비해 유의적(P<0.05)으로 증가하였다. Acetate 농도는 발효 24시간 인삼, 도라지 첨가 구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 감소하였고, propionate 농도는 발효 48시간 인삼, 도라지 첨가구에서 대조구에 비해 유의적(P<0.05)으로 증가하였다. 결과적으로 6가지 천연 식물 추출물의 첨가는 in vitro 반추위 발효성상에는 이상이 없었으나 메탄 감소의 효과는 나타나지 않았다. 추후 6가지 천연 식물 추출물의 농도를 달리하여 추가적인 시험이 필요 할 것으로 사료 된다.

    Figure

    Table

    Chemical composition of diet used in experiments and feedstuff used as a sub- strate for in vitro incubation

    NDF1 : Neutral detergent fiber.
    ADF2 : Acid detergent fiber.

    Chemical composition of diets used in experiment

    Ca : Calcium
    P : Phosphorus
    TDN1 : Total Digestible Nutrients

    The general information regarding extracts used in the experimenta

    aPlant extracts were obtained from Plant Extract Bank (PEB) at Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology
    bR, Root; L, Leaf
    cNature of solvent used for extraction: Methyl alcohol 99.9% for HPLC.

    Effects of natural plant extracts on in vitro pH value

    abcMeans with different superscripts in the same row differ significantly (p<0.05).
    1) SEM : Standard error of the mean

    Effects of natural plant extracts on in vitro dry matter digestibility (%)

    1)SEM : Standard error of the mean

    Effects of natural plant extracts on total gas, carbon dioxide, methane emission in vitro (mL/g DM)

    abcdMeans with different superscripts in the same row differ significantly (p<0.05)
    1) SEM : Standard error of the mean

    Effects of natural plant extracts on in vitro rumen microbial growth rate (OD at 550 nm)

    abcdMeans with different superscripts in the same row differ significantly (p<0.05).
    1) SEM : Standard error of the mean

    Effects of natural plant extracts on in vitro VFA (mM)

    abcdMeans with different superscripts in the same row differ significantly (p<0.05)
    1)SEM : Standard error of the mean

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